PCR基因扩增实验室

针对于PCR基因扩增实验室，本文主要从PCR基因扩增实验室名词解释，PCR基因扩增实验室必须拥有的条件和PCR基因扩增实验室建立办法流程几大方面概要说明，具体更多相关技术知识务必关注我们的网站或者直接联系我们艾普瑞。

    PCR基因扩增实验室名词解释：PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。

    基因扩增实验又称PCR实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域，例如：艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证，动、植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。

    一、PCR基因扩增实验室必须拥有的条件：  

    1、必须在无菌无尘环境下进行操作；  

    2、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书；  

    3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证；  

    4、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求；  

    5、必须拥有标准的的PCR荧光实验室；  

    二、PCR基因扩增实验室建立办法流程：  

    1、建立样品准备区；  

    2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道；  

    3、建立前PCR区；  

    4、PCR实验室试剂的操作；  

    5、在前PCR区建立PCR混合物；  

    6、控制污染的方法；  

    7、后PCR区PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方； 

    PCR实验室布局

    PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊，各工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密相连，需安装物品传递窗。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区，扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等，只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254nm，每20㎡一支40W的紫外灯。

验室各区功能及主要设备  

    1、试剂准备区：主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。  

对于气流压力的控制，本区并没有严格的要求。  

    2、样品制备区：主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。  

本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。  

    3、扩增区：主要进行DNA扩增。此外，已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有：扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。  

本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。  

    4、扩增产物分析区：扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。  

本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。 

    PCR实验室通风系统及压力控制  

    各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。  

    PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式，严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。  

    PCR实验室装饰  

    实验室围护结构应牢固、气密性好；所有阴阳角宜采用圆弧过渡；墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪，材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。五、PCR实验室注意事项  

    1、几个区域的大小设置情况，试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区，空间可以相对小一些，样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱，空间应大一些。